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常规普通PCR常见问题：1. 优化反应条件，梯度摸索退火温度，延长退火延伸时间，增加反应循环数（30-45区间为宜）。2. 对核酸模板进行纯化，或使用商业化核酸提取试剂盒进行提取，增加核酸模板的上样量。3. 优化反应体系（预混体系除外），改变检测体系中的Mg2+浓度及dNTPs用量，更换体系中Buffer。4. 重新设计引物，避免引物二聚体和链内二级结构，在一次稀释引物后可分装成多支小管，减少反复冻融次数。

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分子诊断是当代医学发展的重要前沿领域之一，其核心技术是基因诊断，常规技术包括：（1）聚合酶链式反应（PCR）；（2）DNA测序（DNA sequencing）；（3）荧光原位杂交技术（FISH）；（4）DNA印迹技术（ DNA blotting ）；（5）单核苷酸多态性（SNP）；（6）连接酶链反应（LCR）；（7）基因芯片技术（gene chip）。

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大部分分子诊断实验室的核心技术都主要集中在检测特异性、相对较短的DNA或RNA片段上。该技术能诊断传染性疾病、鉴别影响药物代谢的特殊基因变异型或检测与疾病有关的基因，如与癌症有关的基因。这些检测的核心是实时定量聚合酶链反应（PCR）、转录调节扩增（TMA）、靶向扩增和信号扩增等类似技术的应用。桑格排序和DNA片段分析或采用毛细电泳法的凝胶法都是分子诊断实验室的关键技术，但他们通常还包括检测过程中的扩增步骤。为了能顺利应用那些采用DNA和RNA来诊断疾病的检测，分子诊断实验室须要使用定义明确的工作流程，从而得到稳定的、有效的结果，而当前已存在能帮助诊断实验室实现每个工作流程流水化的特殊工具。

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热启动PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR，可提高反应的特异性。Taq DNA 聚合酶通常在比适宜温度低得多的条件下仍有较强的活性。PCR 反应的初加热过程中，样品温度上升到70℃之前，在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增，影响反应的特异性。热启动可减少非靶序列的扩增，提高反应的特异性。在引物设计时如果某位点因为遗传元件的定位而受限，如site-directed 突变、表达克隆或用于DNA 工程的遗传元件的构建和操作等情况，热启动PCR 尤为有效。

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动物检疫的分类:根据我国现行的动物检疫法律规定，我国动物检疫分为进出境检疫和国内.检疫两大类。①进出境动物检疫。是指对进出我国国境的动物、动物产品，由口岸动植物检疫机关实施的检疫。具体分为:进境动物、动物产品检疫;出境动物、动物产品检疫;过境动物、动物产品检疫;②国内检疫。指对国内流动的动物、动物产品所进行的检疫。具体划分为:产地检疫、屠宰检疫、动物产品检疫。

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布鲁氏菌病：对种畜以外的牛羊进行布鲁氏菌病免疫，种畜禁止免疫。各省份根据评估情况，原则上以县为单位确定本省份的免疫区和非免疫区。免疫区内不实施免疫的、非免疫区实施免疫的，养殖场（户）应逐级报省级农业农村部门同意后实施。各省份根据评估结果，自行确定是否对奶畜免疫；确需免疫的，养殖场（户）应逐级报省级农业农村部门同意后实施。免疫区域划分和奶畜免疫等标准由省级农业农村部门确定。