宿州市实时荧光定量PCR仪标准

热启动Taq酶的产生：在PCR的反应过程中，主要有三个阶段：变性、复性、延伸。Taq DNA聚合酶的复性温度是72℃，但其在低温下也有活性（活性较弱），也能催化引物与模板复性，只是错配率高，发生非特异性复性机率大。这样在未达到72℃之前，反应在Taq酶聚合下不断扩增出非特异性产物，而使实验失败。在传统的PCR反应中，这样由低温上升至高温的过程中，引物错配和二聚体的形成机率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是让PCR反应一开始就在大于70℃下进行。当温度较低时，酶活性被封闭，当温度大于一定温度时酶又开始工作。这样就避免了在低温下复性、延伸的过程，消除引物错配和二聚体形成，减少非特异性产物的产生。我们是如何对Hotstart Taq酶修饰而让它只在高温下才能发挥活性？这就是Hot Start taq酶的作用原理。

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化验室诊断方法- -般采用的检测依据为国家标准、农业标准，其次是有关动物疫病检测的其它技术规程、规范等，还可以采用化验室自行设定的检测方法。应结合化验室条件及样品类型等因素来选择合适的方法。例如，化验室需诊断伪狂犬病，如果没有基因扩增仪，但有酶标仪，就可以采用酶联免疫吸附试验诊断，而不必用聚合酶链反应试验诊断。使用化验室自行设定的检验方法要慎重,因为，一该检验方法是否正确有待验证;二如果将来有争议.上诉法院，会有较大的麻烦。

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加强技术指导。中国动物疫病预防控制中 心要制定国家动物疫病强制免疫技术指南，组织开展省级免疫技术师资培训。国家兽医参考实验室、专业实验室、区域实验室和各省份动物疫病预防控制中 心要持续跟踪病原变化和流行趋势，为各地免疫方案的制定、疫苗的选择和更新提供技术支撑。各省份要组织做好乡镇动物防疫机构、村级防疫员及社会化服务组织的免疫技术培训。疫苗及诊断试剂供应企业要做好培训、技术服务等工作。

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分子诊断的主要技术有核酸分子杂交、聚合酶链反应和生物芯片技术。1.核酸分子杂交技术 具有一定互补序列和核苷酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程，称为核酸分子杂交。杂交的双方是待测核酸序列和探针序列。应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。2.聚合酶链反应（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四种脱氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下发生酶促聚合反应，扩增出所需目的DNA。包括三个基本步骤：双链DNA模板加热变性成单链（变性）；在低温下引物与单链DNA互补配对（退火）；在适宜温度下TapDNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸。3.生物芯片技术是近年发展起来的分子生物学与微电子技术相结合的核酸分析检测技术。起初的生物芯片技术主要目标是用于DNA序列测定、基因表达谱鉴定和基因突变体检测和分析，所以又称为DNA芯片或基因芯片技术。由于这一技术已扩展至免疫反应、受体结合等非核酸领域，出现了蛋白质芯片、免疫芯片、细胞芯片、组织芯片等，所以改称生物芯片技术更符合发展趋势。