太原市实时荧光定量PCR仪标准

在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct）。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。

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分子诊断是指应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术。分子诊断是预测诊断的主要方法，既可以进行个体遗传病的诊断，也可以进行产前诊断。分子诊断主要是指编码与疾病相关的各种结构蛋白、酶、抗原抗体、免疫活性分子基因的检测。合理的标本采集对保证标本的完整性和核酸的定性/定量检测的准确性是至关重要的。标本应严格按照适当的生物安 全指南进行采集，不合适的标本处理会导致核酸降解，产生错误的患者检测结果。

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在动物疫病诊断中，化验室的操作较为关键，对诊断的结果有直接的影响。但是，在当前实验室操作中还存在一-些问题，如检测操作中、检测报告中未填写、不开具《检测委托书》等这些问题的存在严重影响动物疫病的诊断，不利于动物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要对相关工作制度进行不断地完善，促使化验室的操作更加规范化、科学化;加强对实验室人员的专业培训，提高其操作水平。只有这样才能提高动物疫病检测的准确性，为我国的动物疫病防控工作做好铺垫。

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化验室诊断方法采用的检测依据有以下几种:①国家标准以及农业标准;②动物疫病检测的其他规范:③化验室自行设定的检测方法。不管采用何种方法，都需要考虑化验室自身的条件及样品类型，如在对伪狂犬病进行诊断时，实验室有酶标仪，没有基因扩增仪，在诊断时检测人员可采用酶联免疫吸附试验进行诊断。如果送检样品为血清，检测人员则可以采用酶联吸附试验，而不需要采用动物接种试验与病毒分离鉴定方法。