蚌埠市热启动Taq酶研发

大部分分子诊断实验室的核心技术都主要集中在检测特异性、相对较短的DNA或RNA片段上。该技术能诊断传染性疾病、鉴别影响药物代谢的特殊基因变异型或检测与疾病有关的基因，如与癌症有关的基因。这些检测的核心是实时定量聚合酶链反应（PCR）、转录调节扩增（TMA）、靶向扩增和信号扩增等类似技术的应用。桑格排序和DNA片段分析或采用毛细电泳法的凝胶法都是分子诊断实验室的关键技术，但他们通常还包括检测过程中的扩增步骤。为了能顺利应用那些采用DNA和RNA来诊断疾病的检测，分子诊断实验室须要使用定义明确的工作流程，从而得到稳定的、有效的结果，而当前已存在能帮助诊断实验室实现每个工作流程流水化的特殊工具。

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常用的动物检疫方法:常用的动物检疫方法有临床检查、实验室检验等方法。临床检查方法主要看动物的表现(静、动、卧、起、立、精神、食欲等)是否正常，体温、脉搏、呼吸等是否在正常生理指标范围内。实验室检验则依照农业部颁布的动物检疫操作规程规定的检疫方法和判定标准执行。①产地检疫。是指动物离开饲养产地之前的检疫。②屠宰检疫。是指在宰前、宰后及屠宰过程中，对动物及动物产品所实施的检疫。包括宰前检疫②屠宰检疫。是指在宰前、宰后及屠宰过程中，对动物及动物产品所实施的检疫。包括宰前检疫和宰后检疫两个环节。③检疫证明。是指检疫机关给检疫合格的动物、动物产品出具的法律书证。现行农业部统一监制、发放和使用的检疫证明包括《动物检疫合格证明》、《动物产品检疫合格证明》、《出县境动物检疫合格证明》、《出县境动物产品检疫合格证明》和《动物及动物产品运载工具消毒证明》5种。

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相对分子质量为94的Taq DNA聚合酶的活性较高，大约为200000 U/mg，在合成DNA时有一个较高的适温度75～80℃。Taq DNA聚合酶虽然在90℃以上合成DNA的能力有限，但高温时仍比较稳定。有实验证明，在92.5℃、95℃和97.5℃时，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130 min、40 min和5～6 min后，仍可保持百分之50左右的活性，其半衰期较长。所以，在一个PCR预备试验中，每次循环时上限温度为95℃处理20S，则循环50次后Taq DNA聚合酶仍可保持百分之65的活性，能够保证实验的需要。

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选择灵敏度高的热启动Taq酶。一般说，Taq酶的扩增效率高，灵敏度就高，但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低，建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释，在较低的几个稀释度进行PCR检测，选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。目前国内市场上常用的ABI、Bioline、Biog的扩增灵敏度都比较高，但知名品牌T的灵敏度略低，研究者可根据自身的实验要求进行选择。