白城市实时荧光定量PCR仪研发

人们生活水平不断提升,对食品质量安 全提出更高的要求,检疫工作不断深入与完善,仅依靠感观检查已远不能满足当今工作的需要,须使病理化验室发挥的作用.为更好地配合产地检疫,屠宰检疫及农贸市场的肉食品检疫,根据《动物防疫法》,《食品卫生法》,《定点屠宰管理办法》及相关法律法规的精神,结合实际工作需要,高度重视动物的防疫工作.而动物疫病的诊断离不开先进的技术和设备,该文主要围绕动物疫病诊断化验室操作中常见的问题进行分析.

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实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。

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在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct）。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。

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常用的动物检疫方法:常用的动物检疫方法有临床检查、实验室检验等方法。临床检查方法主要看动物的表现(静、动、卧、起、立、精神、食欲等)是否正常，体温、脉搏、呼吸等是否在正常生理指标范围内。实验室检验则依照农业部颁布的动物检疫操作规程规定的检疫方法和判定标准执行。①产地检疫。是指动物离开饲养产地之前的检疫。②屠宰检疫。是指在宰前、宰后及屠宰过程中，对动物及动物产品所实施的检疫。包括宰前检疫②屠宰检疫。是指在宰前、宰后及屠宰过程中，对动物及动物产品所实施的检疫。包括宰前检疫和宰后检疫两个环节。③检疫证明。是指检疫机关给检疫合格的动物、动物产品出具的法律书证。现行农业部统一监制、发放和使用的检疫证明包括《动物检疫合格证明》、《动物产品检疫合格证明》、《出县境动物检疫合格证明》、《出县境动物产品检疫合格证明》和《动物及动物产品运载工具消毒证明》5种。

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布鲁氏菌病：对种畜以外的牛羊进行布鲁氏菌病免疫，种畜禁止免疫。各省份根据评估情况，原则上以县为单位确定本省份的免疫区和非免疫区。免疫区内不实施免疫的、非免疫区实施免疫的，养殖场（户）应逐级报省级农业农村部门同意后实施。各省份根据评估结果，自行确定是否对奶畜免疫；确需免疫的，养殖场（户）应逐级报省级农业农村部门同意后实施。免疫区域划分和奶畜免疫等标准由省级农业农村部门确定。

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在动物疫病诊断中，化验室的操作较为关键，对诊断的结果有直接的影响。但是，在当前实验室操作中还存在一-些问题，如检测操作中、检测报告中未填写、不开具《检测委托书》等这些问题的存在严重影响动物疫病的诊断，不利于动物疫病的防控。因此，在今后工作中，需要对相关工作制度进行不断地完善，促使化验室的操作更加规范化、科学化;加强对实验室人员的专业培训，提高其操作水平。只有这样才能提高动物疫病检测的准确性，为我国的动物疫病防控工作做好铺垫。