朝阳市实时荧光定量PCR仪应用

Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶，在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶，酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中，BIOG热启动Taq酶的指数期较长，可做3重PCR，且扩增曲线的‘S’型不受影响，其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

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高致病性禽流感：对全国所有鸡、鸭、鹅、鹌鹑等人工饲养的禽类，根据当地实际情况，在科学评估的基础上选择适宜疫苗，进行H5亚型和（或）H7亚型高致病性禽流感免疫。对供研究和疫苗生产用的家禽、进口国（地区）明确要求不得实施高致病性禽流感免疫的出口家禽，以及因其他特殊原因不免疫的，有关养殖场（户）逐级报省级农业农村部门同意后，可不实施免疫。

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随着对动物检疫工作的发展与完善,仅依靠兽医的经验检查已经不能满足现今动物疫病诊断的需求,因此,病理化验室开始发挥重要作用.如蓝耳病的病原学检测方式需要采集病猪的扁桃体,淋巴结,肺,肝,脾等,利用10%的中性福尔马林进行固定,经过石蜡切片,HE染色之后使用光镜对样本进行病理学组织检查得出结论,又如猪瘟的病理学检查方式主要有免疫荧光实验,酶联免疫吸附实验,核酸探针技术,基因芯片检测技术等.

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加强技术指导。中国动物疫病预防控制中 心要制定国家动物疫病强制免疫技术指南，组织开展省级免疫技术师资培训。国家兽医参考实验室、专业实验室、区域实验室和各省份动物疫病预防控制中 心要持续跟踪病原变化和流行趋势，为各地免疫方案的制定、疫苗的选择和更新提供技术支撑。各省份要组织做好乡镇动物防疫机构、村级防疫员及社会化服务组织的免疫技术培训。疫苗及诊断试剂供应企业要做好培训、技术服务等工作。

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指导思想。按照保供固安 全、振兴畅循环的工作定位，立足维护养殖业发展安 全、公共卫生安 全和生物安 全大局，坚持防疫优先，扎实开展动物疫病强制免疫，切实筑牢动物防疫屏障。基本原则。坚持人病兽防、关口前移，预防为主、应免尽免，落实完善免疫效果评价制度，强化疫苗质量管理和使用效果跟踪监测，保证“真苗、真打、真有效".目标要求。强制免疫动物疫病的群体免疫密度应常年保持在百分之90以上，应免畜禽免疫密度应达到百分之100，高致病性禽流感、口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体合格率常年保持在百分之70以上。

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热启动PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR，可提高反应的特异性。Taq DNA 聚合酶通常在比适宜温度低得多的条件下仍有较强的活性。PCR 反应的初加热过程中，样品温度上升到70℃之前，在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增，影响反应的特异性。热启动可减少非靶序列的扩增，提高反应的特异性。在引物设计时如果某位点因为遗传元件的定位而受限，如site-directed 突变、表达克隆或用于DNA 工程的遗传元件的构建和操作等情况，热启动PCR 尤为有效。