牡丹江市热启动Taq酶应用领域

Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶，在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶，酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值高。在国内品牌中，BIOG热启动Taq酶的指数期较长，可做3重PCR，且扩增曲线的‘S’型不受影响，其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

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分子诊断是当代医学发展的重要前沿领域之一，其核心技术是基因诊断，常规技术包括：（1）聚合酶链式反应（PCR）；（2）DNA测序（DNA sequencing）；（3）荧光原位杂交技术（FISH）；（4）DNA印迹技术（ DNA blotting ）；（5）单核苷酸多态性（SNP）；（6）连接酶链反应（LCR）；（7）基因芯片技术（gene chip）。

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随着对动物检疫工作的发展与完善,仅依靠兽医的经验检查已经不能满足现今动物疫病诊断的需求,因此,病理化验室开始发挥重要作用.如蓝耳病的病原学检测方式需要采集病猪的扁桃体,淋巴结,肺,肝,脾等,利用10%的中性福尔马林进行固定,经过石蜡切片,HE染色之后使用光镜对样本进行病理学组织检查得出结论,又如猪瘟的病理学检查方式主要有免疫荧光实验,酶联免疫吸附实验,核酸探针技术,基因芯片检测技术等.

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动物疫病包括动物传染病、寄生虫病。动物传染病，即由病原体侵入动物体内，使动物产生具有一定潜伏期和临床症状并具有传播性 的动物疫病，如口蹄疫、鸡瘟、牛肺疫、炭疽、布鲁氏菌病、狂 犬病等。动物寄生虫病，即由寄生虫寄生在动物体内或体表引起 的疾病，如猪囊虫病、旋毛虫病、钩端螺旋体病、血吸虫病、疥瞒等。根据动物疫病对养殖业生产和人体健康的危害程度，我国还 将动物疫病分为下列三类：对人畜危害严重、需要采取紧急、严 厉的强制预防、控制、扑灭措施的为一类疫病；可造成重大经济 损失、需要采取严格控制、扑灭措施，防止疫情扩散的为二类疫 病；常见多发、可能造成重大经济损失、需要控制和净化的为三 类疫病。

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由于应用领域广泛，分子诊断行业在全球得到了飞速发展。随着靶向治疗逐渐成为肿瘤准确治疗的重要方法，释放更多肿瘤个性化用药检测（伴随检测）需求。新靶向药不断推出和个性化用药检测渗透率提升，推动了个性化用药检测行业的快速发展。基因测序已在无创产前检测（NIPT）大规模应用，并基于全 面二孩政策推动需求快速增长。未来随着技术进步和成本下降，基因测序在肿瘤早筛和个人基因组检测领域中应用前景更广。

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热启动PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR，可提高反应的特异性。Taq DNA 聚合酶通常在比适宜温度低得多的条件下仍有较强的活性。PCR 反应的初加热过程中，样品温度上升到70℃之前，在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增，影响反应的特异性。热启动可减少非靶序列的扩增，提高反应的特异性。在引物设计时如果某位点因为遗传元件的定位而受限，如site-directed 突变、表达克隆或用于DNA 工程的遗传元件的构建和操作等情况，热启动PCR 尤为有效。