四平市热启动Taq酶研发

热启动Taq酶产品优势;1. 灵敏度高：可直接扩增1个拷贝的支原体DNA。2. 化学修饰，无动物性DNA污染。3. 性价比高：相对市面上zui常用的热启动聚合酶性价比更高。4. 扩增效率高：荧光定量PCR起峰快，Ct值低，扩增效率高。5. 可重复性高：荧光定量PCR扩增曲线重合度高，受干扰影响少。热启动Taq酶应用：1. 热启动PCR 2. 荧光定量PCR 3. DNA序列测定4. TA cloning.

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人们生活水平不断提升,对食品质量安 全提出更高的要求,检疫工作不断深入与完善,仅依靠感观检查已远不能满足当今工作的需要,须使病理化验室发挥的作用.为更好地配合产地检疫,屠宰检疫及农贸市场的肉食品检疫,根据《动物防疫法》,《食品卫生法》,《定点屠宰管理办法》及相关法律法规的精神,结合实际工作需要,高度重视动物的防疫工作.而动物疫病的诊断离不开先进的技术和设备,该文主要围绕动物疫病诊断化验室操作中常见的问题进行分析.

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热启动Taq酶的产生：在PCR的反应过程中，主要有三个阶段：变性、复性、延伸。Taq DNA聚合酶的复性温度是72℃，但其在低温下也有活性（活性较弱），也能催化引物与模板复性，只是错配率高，发生非特异性复性机率大。这样在未达到72℃之前，反应在Taq酶聚合下不断扩增出非特异性产物，而使实验失败。在传统的PCR反应中，这样由低温上升至高温的过程中，引物错配和二聚体的形成机率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是让PCR反应一开始就在大于70℃下进行。当温度较低时，酶活性被封闭，当温度大于一定温度时酶又开始工作。这样就避免了在低温下复性、延伸的过程，消除引物错配和二聚体形成，减少非特异性产物的产生。我们是如何对Hotstart Taq酶修饰而让它只在高温下才能发挥活性？这就是Hot Start taq酶的作用原理。

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在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真 正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct）。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。